Larry Daley fa il guardiano notturno al Museo di Storia Naturale di New York. E' un po’ maldestro e pasticcione e durante la sua prima notte di lavoro, assiste alla resurrezione di tutte le terribili creature che popolano il Museo. Non sa più che cosa inventarsi per non farle uscire dal palazzo e per cercare di limitare i danni pazzeschi che queste compiono indisturbate, e non sa ancora che i guai sono appena iniziati.